应用建立的方法对4株菌株的stx基因进行了检测。结果如图12所示。该方法可用于快速检测STEC。如图5和图6所示，stx2的最佳退火温度为55，检测线灰度值为362。在55~65退火温度期间，stx1的检测线平均灰度值组高于stx2组。当退火温度为59时，测得的检测线的平均灰度值最大为557。
通过建立基于不对称PCR结合免疫层析技术的STEC标志性毒力基因stx的快速检测方法，可以达到快速准确分型STEC的目的。随着系统中引物浓度的增加，目标单链DNA产物的产量也增加。当stx1和stx2引物用量（上游引物浓度为2 mol/L）为3 L时，stx1检测线灰度值最高为600（图7），检测线灰度值最高stx2为440。继续增加引物浓度对免疫层析效果无明显影响。
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结果显示，23株菌株中STEC CICC10670、CICC10668、CICC0669为stx阳性，其他不携带stx基因的菌株为阴性；结果表明，该方法能够准确检测含有STEC特征毒力基因stx的菌株，且具有良好的特异性。快速确定STEC污染源可以有效缩小疫情范围，而建立简单高效的检测方法是STEC溯源的关键。
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当stx2F:Biotin-stx2R浓度比为1:4时，制备的stx2靶标单链DNA进行免疫层析时灰度值最高，平均灰度值为383.3。作者点评：个人感觉语法没有C++那么简洁. int64_t x=42;
随着下游引物数量的增加，stx1相应单链PCR的产量增加（图2A）。当stx1F:Biotin-stx1R浓度比为1:7时，将stx1制备的目标单链DNA进行免疫层析。分析时的最高灰度值结果（图1），平均灰度值为464.6。为了验证本实验建立并优化的STEC快速分型方法的特异性，选取23株菌株进行stx基因检测。
利用不对称PCR技术产生带有标记的单链DNA，并结合光学SPR生物传感器、纳米金比色法、电化学DNA生物传感器等其他技术，实现目标基因片段的快速、灵敏检测。由于一些反刍动物（如牛、羊等）体内细胞缺乏此类受体，感染后不太可能出现临床症状，因此成为STEC感染的最大宿主。人们经常食用携带STEC的肉制品或饮用被牛或羊粪便污染的饮用水或绿叶蔬菜而受到感染。
不对称PCR系统中添加的引物量影响整个扩增过程中产生的目标单链DNA产物的量。适当增加引物的添加量可以增加扩增结束时产生的目标单链DNA的量。